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Résumé :
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La phosphorylation de la p47phox sur ses différents résidus sérines situés dans sa partie Cterminale constitue une étape décisive et indispensable à l’activation de la NADPH oxydase phagocytaire ou NOX2. Dans cette étude, des anticorps spécifiques de 8 sites (Ser304, 315, 320, 328, 345, 359, 370, 379) de phosphorylation de la p47phox du neutrophile humain ont été développés. Leur utilisation a permis une analyse précise et rigoureuse et a révélé de nouvelles données au sujet de ce processus de phosphorylation de la p47phox dans le neutrophile activé par le fMLF ou le PMA. Les sérines 304, 315, 320 et 328 de la p47phox sont phosphorylées de manière temps et dose dépendante du fMLF et du PMA, alors que ces deux stimulants n’ont pas d’effet sur la phosphorylation de la sérine 345. La phosphorylation très rapide et transitoire induite par le fMLF sur ces 4 sérines est inhibée par la wortmannin, le GF109203X et la génistéine. Alors que le PMA induit une phosphorylation plus lente et continue de ces mêmes sérines et qui n’est inhibée que par le GF109302X. Par ailleurs, la p47phox présente déjà une phosphorylation sur les résidus sérines 359, 370 et 379 dans les neutrophiles au repos qui n’est modifiée ni par les stimulants ni par les inhibiteurs utilisés. Les p47phox phosphorylée sur tous les résidus sérines sont présentes dans le cytosol des neutrophiles fMLF et PMA-stimulés. Alors que dans les membranes et les granules des neutrophiles fMLF stimulés, la p47phox est phosphorylée sur les résidus sérines 315, 320, 328 et 370 avec la sérine 304 qui était faiblement phosphorylée seulement dans les granules. Alors qu’au niveau des membranes et des granules des neutrophiles PMA-stimulés, la p47phox est phosphorylée sur les sérines 304, 315, 320, 328 et 345. Les protéines phosphorylées sur les sérines 359 et 379 sont absentes des membranes et des granules des neutrophiles stimulés par le fMLF ou le PMA. La p47phox est également phosphorylée sur les sérines 304, 315, 320, 328 et 345 dans les lymphocytes B transformés à l’EBV stimulés par la pansorbine ou le PMA et cette phosphorylation est inhibée par le GF109203X. La mutation de tous les résidus sérines de la p47phox en alanine S(303-379)A abolit la production des ROS dans ces cellules. Dans les cellules HL60 en cours différentiation en neutrophiles, la phosphorylation basale de la p47phox, en cours d’expression, sur les résidus sérines 359 et 370 apparait à partir du 3 jour de différentiation puis augmente jusqu’au dernier jour alors que la phosphorylation de la sérine 379 apparait dès le premier jour et reste stable. En fin, l’analyse in vivo de la phosphorylation de la p47phox dans le modèle de la pleurésie induite chez le rat par la λ- carrageenane a montré que la p47phox est phosphorylée transitoirement sur les sérines 304, 320 et 328 alors que la phosphorylation de la sérine 315 est plus stable et continue.
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